層析冷柜在重組磷脂酶C的改性應(yīng)用

      層析冷柜在重組磷脂酶C的改性應(yīng)用，其特征在于：包括以下步驟：

      1、修飾劑SS?mPEG的制備：向燒瓶中加入2g分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇mPEG，再加入4mLN，N?二甲基甲酰胺，充分溶解；隨后加入0.12g丁二酸酐，密封混勻，于100℃邊攪拌邊加熱3h；待反應(yīng)物冷卻后于層析冷柜中逐滴加入10mL乙醚，將所得沉淀過濾干燥；干燥后的沉淀用二氯甲烷復(fù)溶，再用乙醚沉淀，重復(fù)四次；所得沉淀產(chǎn)物真空干燥，在干燥器中保存?zhèn)溆?；將上述終產(chǎn)物溶于4mL N，N?二甲基甲酰胺，加入0.46g N?羥基琥珀酰亞胺和0.825g二環(huán)己基碳二亞胺，30℃溶解過夜，將反應(yīng)產(chǎn)物置于層析冷柜中冷卻至0℃，逐滴加入40mL乙醚，將所得沉淀過濾干燥；干燥后的沉淀用二氯甲烷復(fù)溶，再用乙醚沉淀，重復(fù)四次；終沉淀產(chǎn)物即為活化的聚乙二醇，將其干燥，備用；

      2、修飾酶的制備：將SS?mPEG和磷脂酶C按0～30的摩爾比例溶解于體積為10mL，pH為7.2，濃度為25mM的Tris?HCl緩沖液中，在室溫下震蕩反應(yīng)一定時間，用透析袋4℃透析過夜，所得的修飾酶液冷凍干燥后備用。