層析冷柜原理

層析冷柜原理

  層析冷柜在實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)域?yàn)榉聪鄬游?，親和層析提供試驗(yàn)環(huán)境。

  親和層析是物分子間存在很多特異性的相互作用，它們之間都能夠?qū)Ｒ欢赡娴慕Y(jié)合，這種結(jié)合力就稱為親和力。親和層析就是通過(guò)將具有親和力的兩個(gè)分子，中一個(gè)固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。被固定在基質(zhì)上的分子稱為配體，配體和基質(zhì)是共價(jià)結(jié)合的，構(gòu)成親和層析的固定相，稱為親和吸附劑。親和層析時(shí)首先選擇與待分離的生物大分子有親和力物質(zhì)作為配體，并將配體共價(jià)結(jié)合在適當(dāng)?shù)牟蝗苄曰|(zhì)上。將制備的親和吸附劑裝柱平衡，當(dāng)樣品溶液通過(guò)親和層析柱的時(shí)候，待分離的生物分子就與配體發(fā)生特異性的結(jié)合，從而留在固定相上；而其它雜質(zhì)不能與配體結(jié)合，仍在流動(dòng)相中，并隨洗脫液流出，這樣層析柱中就只有待分離的生物分子。通過(guò)適當(dāng)?shù)南疵撘簩⑵鋸呐潴w上洗脫下來(lái)，就得到了純化的待分離物質(zhì)。

  反向?qū)游鍪窃谖綄游鲋?，高極性物質(zhì)在層析柱上吸附較牢，洗脫時(shí)發(fā)生拖尾現(xiàn)象和保留時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題。如果在支持物上涂上一層高碳原子的疏水性強(qiáng)的烷烴類，洗脫液用極性強(qiáng)的溶劑，如甲醇和水的混合物。則被分離樣品中的極性強(qiáng)的物質(zhì)不被吸附，最先洗下來(lái)，得到較好的分離效果。這種層析法與普通的吸附層析法相反，故稱為反相層析。目前用HPLC做反相層析常用的ODS柱，即在支持物的表面上連接了C18H37Si—基團(tuán)。

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